桉树组织培养技术规程

设置字体大小:【 】 【打印】 【页面调色版  发布时间:2011-06-21 点击次数:


内容简介:桉树组织培养技术规程

1 外植体 
1.1 采用经幼化处理的桉树良种的枝条作为营养繁殖的外植体。
1.2 为减少接种材料的污染,采取外植体时,应选择连续三天以上晴好天气后进行。
1.3 外植体消毒:将外植体用自来水冲洗5分钟。在无菌条件下,用75%酒精消毒5~10秒,无菌水冲洗2次。用1g/L升汞溶液,加吐温-20两滴浸没材料,轻微摇动,消毒2~5分钟,再用无菌水冲洗5次。
2 培养基的配制
2.1 培养基的成分
a) 芽增殖培养基:在培养基中加适量细胞分裂素和生长素,促进芽增殖生长的培养基。
b) 根诱导培养基:在培养基中加适量植物生长素,促进生根的培养基。
2.2 母液配制
    母液用蒸馏水配制。氮、磷、钾等无机盐配制的混合溶液称为大量元素母液,硫、钙、镁、锰、铜、锌、硼等无机盐配制的混合溶液称为微量元素母液,铁盐单独配成母液,有机成分和附加成分分别配成母液。母液按相应浓度配制。配制时,各种物质要充分溶解后混合,配制好的母液置于冰箱冷藏。
2.3 培养基配制
a) 配制:依照所设计的培养基配方,按比例吸取母液注入容量瓶内,加水定容,倒进不锈钢锅。加入凝固剂和糖。边加热边搅拌以免煮糊,使凝固剂和糖完全溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值。将培养基尽快分装到培养瓶内,盖好瓶盖。
b) 培养基消毒
    加热:把分装好的瓶装培养基放入高压消毒锅中密闭、加热。
    排气:当消毒锅的消毒室内气压达到0.05Mpa时,打开冷凝阀,排尽消毒室内冷空气。
    消毒时间:当消毒室内气压达到0.11Mpa、温度达到121℃时,开始计时,保持消毒20分钟。然后关闭开关,慢慢排放热气,待消毒室内的气压表读数为0时打开消毒锅盖,取出培养基,放置到经过消毒的接种室备料间内。
3 无菌操作
3.1 接种前的准备工作
     接种操作人员要保持自身和穿着衣物的清洁。工作前用肥皂洗手,换工作服和拖鞋,戴口罩。每次接种操作前都要用75%酒精擦手消毒。
3.2 超净工作台的准备工作
    超净工作台连续工作4小时,再次使用时要进行消毒,方法是:用消毒酒精喷洒在工作台上的工具、出风板、台面和两边玻璃,再用灭菌纱布抹一次。摆放好必用物品,放到超净工作台台面上的物品都要经过消毒。开启超净工作台上和接种室内的紫外灯,消毒20分钟。消毒结束后,开动超净工作台风机通风15分钟。
3.3 接种
接种动作要轻巧快捷,接种材料与培养基接触良好,深浅适中,分布均匀。接种人员在接种过程中尽量不要说话,以防细菌传播,造成接种材料污染。为防交叉污染,每瓶材料接种完后,盛装过接种材料的碟子、纸张须更换,使用过的镊子、刀具用消毒纱布擦干净,高温灭菌处理后方可再次使用。接种后,盖上和扭紧瓶盖,标注材料名称、接种日期。做好超净工作台的清洁工作。
4 培养条件
4.1 培养室内的温度控制在28(±2)℃。
4.2 光照强度为2000~3000Lx,光照时间每天8~12小时。
5 组培生根瓶苗质量标准
    苗高1.5~3.5厘米,种源明晰、品种优良纯正、无感染、生长健壮、叶色正常、叶片自然展开,根白色,根系完整。

信息来源:广西东门林场国家桉树良种基地 | 责任编辑:365体育娱乐管理员